测定食物中脂肪的方法有两种:索泰(HT)抽提法和罗高氏法
一、索泰(HT)抽提法
索氏抽提法提取一个样品的时间取决于样品的种类,一般需要6-12小时,需较大的人力、物力和时间。而索泰抽提法可用不同沸点的多种溶剂,提取一个样品只需30-60分钟,此法快速、简便、准确、节约溶剂,并且安全省力。
1.原理
原理与索氏提取法相同,即在已烘至恒重的一定量的干样品中加入有机溶剂,在一定的温度下加热,使样品中的脂肪溶于有机溶剂中,然后将溶剂蒸干,称残留物的重量,即为干样品中的粗脂肪(包括磷脂、固醇、游离脂肪酸等脂溶性物质)含量。
2.适用范围
此方法适用于测定食物、饲料、土壤、橡胶、药物以及其他物质中的脂肪。
3.仪器
(1)瑞士Tecator公司设计生产的索泰(HT)(SoxtecHT)系统
(2)分析天平
(3)感量0.0001g
(4)恒温干燥箱
4.试剂
根据不同的样品,选择不同的有机溶剂(分析纯)。例如:测定食物样品用无水乙醚。其它的有机溶剂是:氯仿、石油醚等。
5.操作步骤
5.1提取:将已称重的干燥样品放入滤纸套中,一并置入提取套管内。在已称重的提取杯中加入占容积约1/3(约为25-50ml)的有机溶剂,将杯与提取套管密切相连,使不漏气,然后将调节钮放在垂直位置,将控制钮放到沸腾位。根据溶剂种类不同,调节加热温度,使溶剂沸腾。反复蒸馏提取,一般需30-60分钟。若用无水乙醚为提取溶剂,加热到80℃,蒸馏20-30分钟即可。
5.2淋洗:蒸馏提取完毕,将控制钮移至淋洗位上,使已冷却的溶剂淋洗出样品中最后残留的微量脂溶物,约淋洗30-40分钟。
5.3回收溶剂:将调节钮放到水平位置,溶剂蒸发杆板到蒸发位置上,提取杯中的残留溶剂即全部蒸发。
5.4称重:取下提取杯,在100℃烘箱内烘半小时,放入干燥器内冷却至室温,称重。
6.计算结果
脂肪(g)/100g干样=(W3-W2)/W1
式中
W1=样品重量(g)
W2=提取杯重量(g)
W3=提取杯+样品脂肪重(g)
7.注意事项
7.1同一实验室同时或连续两次测定结果之差不得超过平均值的10%。
7.2仪器应放在通风柜内。
二、罗高氏法
此方法是测定乳类样品中脂肪含量的基准方法。
1.原理
乙醚不能从牛乳及其它液体食品中直接抽提脂肪。需先用碱处理,使酪蛋白钙盐溶解,并降低其吸附力,才能使脂肪球与乙醚混合。加入乙醇,可使乙醇溶解物溶于其中,加入石油醚可使乙醚不与水相混溶,而使分层清晰。将醚层与水相分离,将醚层蒸发后,即得脂肪含量。
2.适用范围
此法适用于测定乳类及乳制品类,如鲜奶、奶粉、酸奶、冰淇淋、奶油等食物中脂肪含量。
3.仪器
(1)分液漏斗
(2)恒温烘箱
(3)脂肪杯
4.试剂
所有试剂,如未注明规格,均指分析纯;所有实验用水,均指蒸馏水。
(1)氢氧化铵(氨水)
(2)95%乙醇
(3)乙醚
(4)石油醚
(5)无水硫酸钠
5.操作步骤
取20ml鲜乳称重,(如取奶粉样品时,需先准确称取一定量的奶粉后,以1:8的比例加蒸馏水调匀)置于150ml分液漏斗内,加2.5ml氨水,混匀。加入20ml95%乙醇,混匀。?在上述乳混合液中加入30ml乙醚,猛烈振摇1分钟,再加入30ml石油醚,同样振摇1分钟,静置分层。
分层后,将下层残液放入另一容器内,将上层乙醚液通过无水硫酸钠过滤入己恒重的脂肪杯内。再用10ml乙醚和10ml石油醚重复提取残液一次,仍通过无水硫酸钠过滤入原有的醚提取液杯内。最后用少量洁净的无水乙醚淋洗无水硫酸钠。将上述的醚提取液放在索泰氏抽提器从40-80℃缓缓加热,蒸馏出醚液后,取下杯,在100℃烘箱内烘半小时,放入干燥器内冷却至室温,称重。
*第二次用醚液重复提取残液时,不要猛烈振摇,以防乳化。
6.结果计算
计算公式:
鲜乳脂肪(g)/100g鲜乳=(W3-W2)/W1×100?
式中
W1=鲜乳重量(g)
W2=脂肪杯重量(g)
W3=鲜乳脂肪+脂肪杯重量(g)
7.注意事项
同一实验室同时或连续两次测定结果之差不得超过10%。
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