分居期间抚养费可以补。因为在夫妻分居，在法律上婚姻关系仍然存续，双方的收入仍然是夫妻共同财产，子女抚育费应当在共同财产中支出给付。子女也可向拒不履行抚养义务的父母要求支付抚养费。《最高人民法院关于适用〈中华人民共和国民法典〉婚姻家庭编的解释（一）》第四十三条规定，婚姻关系存续期间，父母双方或者一方拒不履行抚养子女义务，未成年子女或者不能独立生活的成年子女请求支付抚养费的，人民法院应予支持。

一、民事诉讼离婚能否分居抚养费

依据我国相关法律的规定，夫妻在婚姻关系结存期间分居的，并且协商好一方给付抚养费的，另一方不给付的，离婚后也可以向法院主张给付的。《民法典》第一千零六十七条，父母不履行抚养义务的，未成年子女或者不能独立生活的成年子女，有要求父母给付抚养费的权利。成年子女不履行赡养义务的，缺乏劳动能力或者生活困难的父母，有要求成年子女给付赡养费的权利。《民法典》第一百九十六条，下列请求权不适用诉讼时效的规定：(一)请求停止侵害、排除妨碍、消除危险;(二)不动产物权和登记的动产物权的权利人请求返还财产;(三)请求支付抚养费、赡养费或者扶养费;(四)依法不适用诉讼时效的其他请求权。

二、离婚两个小孩抚养费怎么确定

1、离婚有两个孩子，如果两个孩子都由父母一方直接抚养的，另一方承担抚养费的，一般在月收入的20%-50%；

2、对于有两个子女的，双方各抚养一个的，实务中抚养费按下面的情形来考虑：

（1）夫妻离婚后，双方经济条件相当，子女的年龄相当，抚养费开支大体一致的，这种情况下各抚养一个子女，相互不再支付抚养费；

（2）如果一方的经济条件明显优于另一方，或者子女的抚养费开支并不对等，这样即使各抚养一个子女，另一方也可以仍要求对方支付一定的抚养费差额；

（3）离婚协议或法院判决，各抚养一个子女，相互不支付抚养费的，特殊情况下，如果其中一方直接抚养的子女出现重大开支的(例如，突发某种重大疾病)，就重大开支部分，仍然可以要求分担。

3、其实，抚养费确定多少，是按子女的实际基本需求来定的，抚养费并不是一成不变的，双方各抚养一个子女，存在相互不支付抚养费、或支付一部分抚养费等情形，这要根据父母一方的经济状况、子女的实际需要来确定。

4、法律依据：《中华人民共和国民法典》

第一千零六十七条【父母的抚养义务和子女的赡养义务】父母不履行抚养义务的，未成年子女或者不能独立生活的成年子女，有要求父母给付抚养费的权利。

成年子女不履行赡养义务的，缺乏劳动能力或者生活困难的父母，有要求成年子女给付赡养费的权利。